脂肪組織作為一個新近發現的內分泌器官，可分泌多種細胞因子。這些因子在胰島素抵抗及2型糖尿?。═2DM）發病機制中起著重要作用。脂聯素（Acrp30）也由脂肪組織分泌，在抗動脈粥樣硬化調節糖脂代謝、改善胰島素抵抗等方面具有廣泛的生理功能，與糖尿病有密切的關系。本研究著重探討其抗炎作用，首先將構建的小鼠Acrp30基因過表達質粒導入C57BL/6J小鼠體內，觀察后者血漿Acrp30的水平，并檢測其對小鼠炎性因子分泌的影響，旨在進一步探討Acrp30在脂代謝紊亂發生和發展中的作用。

1材料與方法

1.1主要試劑

Acrp30基因過表達載體為本課題組前期構建并保存；C57BL/6J小鼠購自重慶醫科大學實驗動物中心；酶聯免疫 吸 附 法 （ELISA）小 鼠Acrp30檢測試劑盒購自德國Phoenix公司；炎性因子檢測試劑購自美國BD公司。

1.2動物分組及處理

C57BL/6J小鼠20只，8周齡，隨機分為pcDNA3.1（+）空質粒注射組（NC組，n=10），pcDNA3.1-Acrp30重組真核表達質粒注射組（PA組，n=10），空載及表達質粒（1mg/kg）注射于小鼠股四頭肌。于注射前及注射后72h采集空腹尾靜脈血，分離血漿。

1.3小鼠血漿Acrp30測定

采用ELISA法測定小鼠血漿Acrp30水平，操作按照ELISA試劑盒說明書進行。以系列水平Acrp30標準品繪制A450標準曲線，根據標準曲線計算Ac-rp30水平。

1.4小鼠血漿炎性因子水平測定

采用流式細胞法測定小鼠血漿白細胞介素-2（IL-2）、白細胞介素-3（IL-3）、白細胞介素-6（IL-6）、白細胞介素-8（IL-8）和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）水平，操作按照BD公司炎性因子測定試劑盒說明書進行。

1.5統計學處理

數據處理應用SPSS18.0軟件，采用配對樣本t檢驗做統計學分析，各項數據資料以x±s表示。P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1小鼠血漿Acrp30分泌水平變化。

小鼠血漿Acrp30ELISA測定結果，見表1.質粒注射后PA組血漿Acrp30水平較注射前均升高（P<0.05），而NC組在注射前后差異無統計學意義（P>0.05）.

2.2小鼠血漿炎性因子分泌水平變化

小鼠血漿IL-2、IL-3、IL-6、IL-8及TNF-α流式細胞儀測定結果，見表2.質粒注射后PA組血漿5項指標水平較注射前均降低（P<0.05），而NC組在注射前后差異無統計學意義（P>0.05）。

3討論

肥胖、糖尿病、代謝綜合征等代謝性疾病患者都伴隨炎性反應，作為內分泌器官，脂肪細胞可以分泌大量的細胞因子，其中包括Acrp30,這些細胞因子接受外界信號并對之產生反應，從而調節食欲、胰島素敏感性、炎性反應等過程。Acrp30是一種與胰島素抵抗密切相關的細胞因子，主要由脂肪細胞分泌，與受體（AdipoR1、AdipoR2）結合后具有增強胰島素敏感性、抗高血糖、抗動脈粥樣硬化等生物作用[1-3].另有研究表明，低Acrp30血癥是動脈粥樣硬化發生的獨立危險因素，隨著動脈粥樣硬化的發展，血漿Acrp30水平呈進行性下降趨勢[4].對人體的研究發現，Acrp30水平能預示T2DM和冠心病的發展，并在臨床試驗中表現出抗糖尿病、抗動脈粥樣硬化和炎性反 應的潛力[4-5].

Acrp30通過激活蛋白激酶A（PKA）信號通路，使TNF-α介導的核因子-κB（NF-κB）的活化受到抑制，從而減輕內皮細胞的炎性反應[6].對體質量指數（BMI）正常和異常人群中IL-6、IL-10、TNF-α與Acrp30關系的研究表明，BMI高的人群Acrp30表達顯著降低，IL-6和TNF-α水平則升高，相反，IL-10水平則顯著下降[7].可以抑制人的白細胞產生IL-10,下調巨噬細胞中前炎性細胞因子干擾素-γ（IFN-γ）的產生[8].Matsubara等[9]研究發現，低Ac-rp30血癥與超敏C反應蛋白血癥存在負相關，提示Acrp30可能具有抗炎作用，以上研究提示Acrp30是炎性反應中重要的調節因子。

為了進一步評價Acrp30和炎性因子的相互作用，本研究利用構建 的Acrp30真 核表達載 體pcDNA3.1-Acrp30轉 入C57BL/6J小鼠，成功上調了小鼠血漿Acrp30水平，并發現血漿炎性因子IL-2、IL-3、IL-6、IL-8和TNF-α水平卻顯著受抑。

結果證明，Acrp30的過表達可拮抗小鼠分泌炎性因子，從而拮抗炎性反應過程。