乳腺增生?。℉yperplastic disease of breast，HDBA）以乳房部腫塊和疼痛為兩大主癥，屬乳腺結構不良病變，主要包括單純性乳腺增生癥和乳腺囊性增生癥2種[1]。迄今為止，HDBA的病因尚未完全闡明，現代醫學認為內分泌失調是乳腺增生的主要因素，目前西醫治療尚未取得滿意的療效。而中醫理論認為，HDBA屬于中醫的“乳癖”范疇，與肝、胃、腎、沖任諸經有密切關系，病機既有肝腎不足之本虛，又有氣滯、血瘀、痰凝之標實。所以，HDBA是一種本虛標實、虛實夾雜的疾病[2]。中醫對于HDBA的治療多根據辨證論治，以內服湯藥為主。
中藥復方是治療HDBA的首選用藥，且多種方藥療效肯定，已廣泛應用于臨床。HDBA動物模型實驗研究表明，中藥治療HDBA的作用機制是調節神經內分泌免疫網絡，使雌、孕激素達到平衡，增強機體免疫力，改善血液流變學等[3]。然而，當前針對HDBA動物模型的構建也存在諸多不足，其病理模型的復制還缺少成熟的不典型增生的復制模型方法。在對模型的評價或療效評價方面，多數實驗只對增生發生率或增生程度如輕度增生、重度增生出現率之間進行比較[4]。因此，為進一步探索中藥療效的機制，建立規范的中藥治療HDBA動物模型的評價體系就顯得尤為重要。為此，筆者以“中藥“”乳腺增生動物模型“”Chinese herb”和“Hyperplasia of mammary glands”等組合作為關鍵詞，在中國知網、維普及萬方、PubMed、Eisevi-er 及 Springer Link 等數據庫檢索 2010－2014 年中藥對 HDBA動物模型治療的評價指標的相關文獻，就中藥治療HDBA動物模型的相關評價指標進行綜述，以期對臨床更有效地治療HDBA 提供參考。
1 動物模型的建立
HDBA 動物模型的要求與臨床病理變化相近，能客觀反映被測藥物的作用，可作為篩選和鑒定治療HDBA藥物的常用方法。首先，實驗動物要選擇與人體結構、功能、代謝及疾病特征相似的動物。雌性未孕家兔和大鼠通常被用于此模型。相較于家兔而言，大鼠的操作簡單易行、成功率高、重復性好、飼養成本較低，因而大多實驗采用大鼠建模。而家兔的優點是其乳腺組織較大鼠明顯，有利于形態學的觀察，但操作復雜，僅限于需要檢測某些特定指標或需要長時間進行實驗研究時采用[5-6]。
2 模型建立方法
雌、孕激素聯合復制模型法是公認的HDBA復制模型方法。該法通過擾亂動物體內的性激素分泌，誘導動物的乳腺組織增生。其中，雌激素可刺激乳腺上皮細胞和間質細胞增生，孕激素在一定程度上可對抗雌激素作用，促進腺泡增生。
因此，先給予一定劑量的雌激素以刺激乳腺組織增生，隨后給予孕激素以進一步促進乳腺腺泡的發育，兩者的協同作用可使大鼠的乳腺出現增生[7]。該法有兩種方案：一是手術摘除卵巢后給予雌、孕激素；二是保留卵巢，直接給予雌、孕激素。摘除卵巢可避免內源性雌、孕激素的影響，且可控制雌、孕激素在體內的含量，但手術復雜，對動物有一定的創傷，易誘發感染，也有可能帶入外源性干擾因素，因此現在常選擇直接給予雌、孕激素的方法。具體給藥方法則為：肌肉注射苯甲酸雌二醇0.5 mg（/kg·d），注射 25 d；之后再注射黃體酮 5 mg（/kg·d），注射5 d；復制模型時間共30 d[8]。
3 模型藥效學評價指標
HDBA 動物模型復制成功后，常選用以下藥效學評價指標觀察藥物對HDBA的治療作用。首先，通過肉眼觀察或游標卡尺測量模型組和藥物組實驗動物乳腺的大小及高度，初步判斷藥物對HDBA的影響。然后，從病理組織形態學觀察、血清生化指標、血液流變學和分子生物學水平等方面評價藥物的療效。
3.1 乳腺外觀和病理組織形態學觀察
動物乳腺組織做病理切片并進行蘇木精-伊紅染色（HE染色），則可觀察乳腺增生組織病理變化[9-10]：乳腺小葉數量增多，體積增大；小葉內腺泡和導管擴張，管腔內有分泌物；腺上皮細胞肥大，細胞漿透亮。段好剛等[9]通過研究疏乳消塊丸對大鼠HDBA的治療作用，發現與正常組大鼠比較，模型組大鼠的乳房直徑和乳頭高度顯著增大，疏乳消塊丸組與模型組比較，大鼠乳房直徑、乳頭高度顯著減小。疏乳消塊丸治療30 d后，與模型組大鼠比較，其乳腺小葉數、平均腺泡數明顯減少，腺泡直徑及數量、腺腔內分泌物明顯減少，且相對于陽性對照組腺泡分泌現象改善更明顯，說明疏乳消塊丸對HDBA有治療作用。宋易華等[11]通過觀察乳康方對大鼠HDBA模型的治療作用，發現乳腺組織病理學可見模型組大鼠乳腺增生呈彌散性、無局部包塊，腺泡和小葉顯著增加，脂肪和結締組織明顯減少，腺泡腔和腺導管腔明顯擴張，腺泡腔內含分泌物及脫落的細胞。與模型組比較，乳康方Ⅰ組和乳康方Ⅱ組乳腺組織上述變化有顯著改善，且乳康方Ⅱ組的改善尤為明顯。林峰等[12]通過消結安膠囊治療HDBA大鼠實驗研究發現，正常組大鼠乳腺導管上皮細胞排列整齊，導管腔腺泡腔無擴張，小葉及小葉中腺泡數很少；模型組大鼠乳腺導管上皮細胞排列紊亂、增生，管腔明顯擴張，內有脫落的上皮細胞及分泌物，小葉及小葉中腺泡數明顯增加。與模型組比較，三苯氧胺組、不同劑量消結安組大鼠的乳頭直徑、腺泡腔、小葉導管腔縮小，小葉腺泡數減少，說明三苯氧胺、不同劑量消結安治療均可以有效對抗雌激素引起的乳腺增生。
3.2 血清生化指標測定
3.2.1 血清中激素水平測定 現代醫學認為，激素內分泌失調是乳腺增生發病的主要原因。導致內分泌紊亂的因素很多，主要是雌、孕激素平衡失調。通過測定血清中雌二醇、孕酮、睪酮以及催乳素的含量水平，可反映乳腺增生中藥對血清中激素水平的影響[13]。王雄等[14]通過觀察回乳抑增Ⅰ號（處方組成：麥芽、夏枯草、玄參、浙川貝、郁金、丹參、白芥子、淡昆布、牡蠣、山慈菇）對實驗性HDBA大鼠的作用，結果發現，與模型組大鼠比較，回乳抑增Ⅰ號能顯著降低大鼠血清雌二醇、泌乳素、促卵泡激素、促性腺激素釋放激素和5-羥色胺的含量，顯著提高孕酮、促黃體生成素的含量，顯著減輕乳腺小葉數、小葉內腺泡數和分泌物。由此表明，回乳抑增Ⅰ號能改善大鼠血清激素水平的紊亂，抑制HDBA的發生。郭宇飛等[15]通過觀察利癖消膠囊對HDBA大鼠血清性激素的影響，發現與模型組大鼠比較，利癖消膠囊組大鼠可明顯降低血清雌二醇和催乳素的含量，顯著升高血清孕酮水平，提示利癖消膠囊能調節雌激素、孕激素比例在正常范圍內，以達到治療乳腺增生的目的。姜云云等[10]通過研究乳癖消減方抗實驗性大鼠乳腺增生作用，發現復制模型大鼠形成乳腺增生后，血清雌二醇水平顯著增高，孕酮水平顯著降低，其二者的比值增大。經藥物治療后乳癖消減方（8 g/kg）對大鼠HDBA的治療效果顯著，主要表現為可使模型大鼠顯著升高的血清雌二醇含量基本恢復到正常水平，使血清孕酮的含量顯著上升，從而使二者的比值基本恢復正常。
3.2.2 血清中超氧化物歧化酶（Malondialdehyde，MDA）活性和丙二醛（Superoxide dismutase，SOD）含量的測定 自由基活動增強、脂質過氧化作用增加也是引起HDBA的原因之一。乳腺組織中雌二醇含量增加的同時，伴隨著脂質發生過氧化反應，最終產物為MDA；同時，HDBA發生時，體內SOD減少，不能完全催化MDA發生歧化反應變成H2O 和 O2，導致MDA在體內積累。而MDA具有細胞毒性，能導致乳腺細胞損傷[16]。因此，測量血清中SOD活性和MDA含量也可判斷中藥對HD-BA 是否有保護作用。周會等[17]
通過研究抗乳增片對HDBA模型家兔的作用，發現模型組家兔的血清MDA比正常組家兔顯著增加，SOD比正常組家兔顯著減少。家兔灌胃抗乳增片4周后，血清MDA比模型組家兔顯著減少，SOD活性較模型組家兔顯著升高。劉聰等[16]通過探討柴青消癖膠囊對HDBA模型大鼠的治療作用，發現模型組大鼠SOD水平較低，與對照組大鼠比較差異有顯著性差異；陽性西藥組、陽性中藥組、柴青消癖膠囊各劑量組大鼠SOD水平較模型組顯著升高，而MDA水平有所降低。以上研究提示，中藥對家兔HDBA的治療作用可能與其對抗自由基、防止自由基對乳腺細胞膜的侵害有關。
3.3 血液流變學指標測定
已有文獻報道，HDBA患者的血液流變學發生變化，呈高黏狀態[18]。檢測全血黏度、血漿黏度、血沉等反應血液流變學指標，可判斷中藥能否改變血液病理狀態、改善全身及乳腺局部的血液循環，從而改善HDBA癥狀[17]。唐榮等[19]通過實驗發現，柴瓜消結湯各劑量組家兔全血黏度、血漿黏度、血沉和血細胞比容均恢復到空白對照組正常水平，與模型組比較差異有統計學意義，表明柴瓜消結湯具有活血化瘀的功效，可明顯改善血液流變性。李海華等[20]通過研究乳癖安膠囊對實驗性HDBA 大鼠的作用機制，結果顯示模型組大鼠與空白對照組大鼠比較，不同切變率、全血黏度及血漿黏度均明顯增高，表明乳癖安膠囊可顯著降低HDBA大鼠不同切變率下的全血黏度和血漿黏度，改善其血液流變學的異常。趙艷威等[21]通過觀察乳痛消浸膏對實驗性HDBA的作用，結果發現藥物組血液流變學指標與模型組比較有所改善，乳痛消組全血黏度顯著低于模型組，且高劑量組作用優于中、低劑量組。
3.4 分子生物學水平檢測
近年來，分子生物學技術的發展為抗HDBA中藥作用機制的研究提供了有力工具。韋永芳等[22]發現，健乳靈所用的鹿角霜、補骨脂、路路通等有明顯的調節和對抗雌二醇對乳腺管的刺激增生作用，并通過降低大鼠乳腺組織p16、p53的表達，減弱雌激素在靶細胞上的生物學效應，產生抑制和治療HD-BA 的作用。陳樹花等[23]發現，使用乳塊消湯能在分子學水平上下調凋亡抑制因子Survivin、上調含半胱胺酸的天冬氨酸蛋白水解酶（Caspase）8的表達，促進細胞凋亡，從而抑制HDBA的進一步發展。多項研究表明，雌激素受體、孕激素受體的過量表達會加劇HDBA或乳腺癌的發生、發展[24-26]。王忠超等[27]通過蛋白免疫印跡法進一步驗證M-1號對HDBA大鼠乳腺組織孕激素受體表達的影響，發現對雌激素受體表達量的兩種檢測方法所得結果具有相同變化趨勢，即HDBA大鼠乳腺組織中孕激素受體的表達量較正常對照組大鼠有顯著升高，M-1號各劑量組大鼠孕激素受體的表達量較模型對照組大鼠顯著降低，雖略高于正常對照組大鼠，但與陽性藥對照組大鼠比較差異無統計學意義。
4 結語
綜上所述，采用雌性未育大鼠（保留卵巢）給予苯甲酸雌二醇和黃體酮成功建立大鼠HDBA模型，通過乳腺的大小及高度以初步判斷藥物對HDBA的影響，檢測血清中激素的水平以判斷藥物對雌-孕激素平衡的調節作用；而血液流變學改變可反映藥物對乳腺微循環的作用；病理組織形態學和分子水平研究可進一步闡明藥物干預HDBA的作用機制。因此，通過以上指標的測定，可更加客觀地評價中藥對HDBA動物模型的作用。
參考文獻
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