大黃酚\\( chrysophanol，Chry\\) 是蓼科植物掌葉大黃\\( Rheum palmatum L． \\) 根中游離蒽醌衍生物，有研究表明Chry 對腦缺血再灌注\\( IR\\) 所致小鼠記憶功能損傷有明顯保護作用，但關于 Chry 對腦 IR 引起心臟損傷的保護作用的報道少見。我們擬通過觀察 Chry 對腦 IR 后小鼠心臟組織中過氧化氫\\( H2O2\\) 含量及過氧化氫酶\\( catalase，CAT\\) 活力變化的影響，探討 Chry 對腦 IR 心臟損傷的保護作用機制，為其應用于臨床治療腦血管疾病引起的心臟組織損傷的保護作用提供參考。
1 材料與方法
1． 1 動物與試劑
1． 1． 1 動物 昆明種小鼠 80 只，體質量\\( 28 ± 2\\) g，雌雄不拘，中國醫學科學院北京藥物研究所提供，許可證號:\\( 京\\) 2004200012。
1． 1． 2 藥物與試劑 Chry\\( 中國藥品生物制品檢定所，純度≥98%，批號 110796 － 200412\\) ，實驗前用 N，N － dime-thyl － Formamide 溶解，聚山梨酯 － 80 助溶，0． 9% 氯化鈉注射液稀釋至所需濃度。N，N － dimethyl － Formamide: 聚山梨酯 －80∶ 0． 9% 氯化鈉注射液為 1∶ 1∶ 8。CAT 可見光試劑盒及 H2O2試劑盒由南京建成生物工程研究所提供。
1． 1． 3 儀器 FSH － 2 內切式組織可調高速勻漿器\\( 江蘇大地自動化儀器廠\\) ; LabTech 全自動紫外可見分光光度計\\( 北京萊伯泰科儀器有限公司\\) ; 二列六孔電熱恒溫水浴鍋\\( 北京精科華瑞儀器有限公司\\) ; Sigma3K30 高速冷凍離心機\\( 德國 Sigma 公司\\) 。
1． 2 方法
1． 2． 1 造模 3． 5% 水合氯醛\\( 10 mL / kg，腹腔注射\\) 麻醉小鼠，仰臥位固定，自胸骨柄到下頜骨間行 5 ～8 mm 正中縱向切口，分離兩側頸總動脈，分離后用液體石蠟浸泡過的黑色手術線穿過左右二側頸總動脈，盡量恢復兩側頸總動脈到原位，黑色手術線在氣管上方打松反手結，結的松緊以不壓迫氣管為宜。在每側頸總動脈上方的黑線上穿過一條用液體石蠟浸泡過白色手術線，按文獻［2］方法埋線后縫合切口。術后 48 h 將頸下部黑色手術線拉緊，阻斷兩側頸總動脈造成大腦缺血狀態，5 min 后輕拉兩側白色手術線，使頸總動脈恢復血液再灌注。
1． 2． 2 實驗分組 造模成功 74 只，術后 48 h 將清醒、活動正常的造模成功的 74 只小鼠隨機分為 5 組，藥物組\\( IR+ Chry\\) 45 只，分為高、中、低劑量 3 個組各 15 只，于缺血前30 min 分別腹腔注射 Chry 10． 0、1． 0、0． 1 mg / kg; 模型組 15只，于缺血前30 min 腹腔注射溶劑 10 mL/kg; 假手術組 14只，進行手術，但不進行腦 IR，腹腔注射溶劑10 mL/kg。
1． 2． 3 小鼠心臟組織內 H2O2含量及 CAT 活力的測定模型組和藥物組小鼠恢復血供后 10 min 快速斷頭處死，在 0． 9% 氯化鈉注射液冰塊上迅速取心臟組織，4 ℃0． 9% 氯化鈉注射液沖洗，濾紙吸干，置于 1 mL 離心管內，并置于 Forma －86c ULT 冰柜內冷凍貯存。實驗時取出制成 10% 心臟組織勻漿，3 500 ～4 000 r/min，－4 ℃低溫離心 10 min 后取適量上清液測定 H2O2含量和 CAT 活力。
每 mg 組織蛋白每 s 分解 1 μmoL 的 H2O2的量為一個CAT 活力單位。
1． 3 統計學方法
應用 SPSS 16． 0 統計軟件進行統計學分析，計量資料用均數 ± 標準差\\( x珋 ± s\\) 表示，采用 t 檢驗。
2 結 果
2． 1 各組心臟組織中 H2O2含量比較 見表 1?！颈?】
由表 1 可見，與假手術組比較模型組小鼠心臟組織內H2O2含量明顯增加﹙ P ＜0． 05\\) ; 與模型組比較高劑量大黃酚組、中劑量大黃酚組小鼠心臟組織內 H2O2含量明顯減少\\( P ＜0． 01\\) 。
2． 2 各組心臟組織中 CAT 活力比較 見表 2?！颈?】
由表 2 可見，與假手術組比較模型組小鼠心臟組織內CAT 活力明顯降低\\( P ＜ 0． 05\\) ; 與模型組比較高劑量大黃酚組小鼠心臟組織內 CAT 活力明顯提高\\( P ＜0． 01\\) 。
3 討 論
急性缺血性腦血管疾病是老年人的常見病、多發病，發病后，可導致某些器官功能損傷甚至衰竭，進而發生多個器官功能損傷甚至衰竭，是老年缺血性腦血管疾病患者死亡和致殘的主要原因，其中心、肝、肺、腎、胃腸道容易受累，表現為心肌梗死，肝細胞水腫、體積增大，肺水腫，急性胃黏膜病變，腎衰竭及代謝等系統或器官的損傷，病死率與器官衰竭數目呈正相關，尤其是引起的心肌損傷，后果更嚴重。因此，積極探討腦缺血疾病引起的多器官損傷的中藥單體藥物治療和預防具有重大醫學價值和社會意義。
多數學者研究后認為腦缺血后再灌注可引腦組織損傷加重，與腦缺血時間及再灌注時間無相關。缺血性腦血管疾病患者生病后，導致多器官功能障礙綜合征\\( multiple organ dysfunction syndrome，MODS\\) 。引起 MODS 的病因很多，往往是綜合性的、多因素的?，F代研究表明有以下一些因素: 嚴重創傷、燒傷和大手術后，低血容量休克，敗血癥及嚴重感染，大量輸液、輸血及藥物使用不當，毒物和中毒等。MODS 的威脅日漸突出，目前是 ICU 內導致患者死亡最主要的原因之一，也是創傷及感染后最嚴重的并發癥之一，對患者預后影響明顯。如何提高其診斷和救治水平，已是當務之急，尤其是當今發病率很高的腦缺血性疾病發生后而引起的 MODS，如何預防其發生，如何對各組織起到保護作用，是研究的必然趨勢。
有研究認為，Chry 對腦 IR 損傷所造成的其他組織、器官損傷有較強的保護作用，可減輕心肌、腎臟等器官因腦缺血所引起的損傷。本研究結果表明，Chry 可增強腦IR 小鼠心臟組織中 CAT 活性，促進 H2O2分解，減少心臟組織中 H2O2含量，進而減少氧自由基的生成及脂質過氧化反應。H2O2是活躍的強氧化劑，能通過氧化反應破壞細胞新陳代謝產生一系列新的氧化性活躍物質—自由基，而 CAT 是細胞內抗氧化酶，能夠消除細胞新陳代謝的副產物—H2O2。
通過本研究結果，我們認為 Chry 可增強腦 IR 損傷后心臟組織中 CAT 活性，減少心臟組織中 H2O2含量，從而發揮 IR 后心臟損傷的保護作用，可為 Chry 的基礎研究及臨床應用提供有益的參考。
參考文獻
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