藥物經體內代謝通常會引起損傷，對乙酰氨基酚（撲熱息痛）是乙酰苯胺類解熱鎮痛藥，是醫學臨床常用的解熱鎮痛藥物之一。其常規劑量用藥安全可靠，但在大劑量應用則可引起動物和人嚴重肝腎損傷，甚至死亡[1-2].孫大慶等[3]指出殘留的抗微生物藥對人體可產生多種直接和間接危害，甚至免疫力降低過敏反應和細菌耐藥性等毒害作用?？梢娏私馑幬锎x機制可為更好地合理用藥提供依據。對乙酰氨基酚在體內主要由細胞色素 P450 酶家族成員CYP2E1 酶代謝，且可影響 CYP2E1 的酶活性[3],從而加重其對肝臟的損傷。目前都以活體動物為研究對象，通過檢測血清及肝組織勻漿中肝功能指標的變化，來揭示肝損傷的程度。姚光弼等[5]研究證實對乙酰氨基酚可引起 GSH 含量降低，MDA 升高。因此實驗通過檢測肝損傷有關的六種酶來探索對乙酰氨基酚誘導大鼠急性肝損傷作用，也可為深入研究對乙酰氨基酚對 CYP2E1 的誘導作用奠定了基礎。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 藥品與試劑
對乙酰氨基酚，批號：D1301026 購自 sigma 公司；谷草轉氨酶（AST,批號：2013017）、谷丙轉氨酶（ALT,批號：2013034）、堿性磷酸酶（ALP,批號：2013001）、超氧化物歧化酶（SOD,批號：20140311）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX,批號：20140312）、（丙二醛 MDA,批號：20140310）、總蛋白測定試劑盒（批號：20140319），均購自南京建成生物工程研究所。
1.1.2 實驗動物
實驗用雄性 Sprague-Dawley （SD） 大鼠，180~220 g,購自吉林大學白求恩實驗動物中心。
1.1.3 實驗儀器
UV-8000 紫外分光光度計，上海元析儀器有限公司；JD100-3B 分析天平，沈陽龍騰電子有限公司；以及電熱恒溫箱和離心機等。
1.2 方法
1.2.1 實驗動物分組及用藥
取 SD 大鼠 60 只，隨機分成 4 組，分別為對照組及對乙酰氨基酚低（75 mg·kg-1）、中（150 mg·kg-1）、高（250 mg·kg-1）劑量組，每組 15 只。采用皮下注射給藥，對照組給予生理鹽水，給藥后 1、6、24 h,各組隨機取 5 只大鼠，檢測各項指標。
1.2.2 指標檢測大鼠固定后，斷頭取血，置于含有抗凝劑的試管中，3 500 r·min-1離心 5 min,上清即為血漿，-20 ℃保存待檢。同時，迅速剖取肝臟，冰生理鹽水沖洗，濾紙吸濕后，稱取濕重 0.3 g 左右，加入預冷的生理鹽水，冰水中制成 10%勻漿，4 ℃ 6 000 r·min-1離心5 min,提取上清液，-20 ℃保存待檢。其中 AST、ALT:2,4-二硝基苯肼法，ALP:磷酸苯二鈉比色法，SOD:黃嘌呤氧化酶法，MDA:硫代巴比妥酸法（TBA），GSH:DTNB 改良比色法。所有酶的檢測均按照試劑盒說明書方法操作。
1.2.3 數據處理實驗的計量數據均以x軃±S 表示。采用 SPSS11.5統計軟件處理，組間比較采用單因素方差分析（ANOVA），多個樣本均數之間的多重比較用 Post-Hoc LSD 法。
2 結果
2.1 血漿中 AST、ALT 和 ALP 的變化。
實驗組大鼠血漿 AST 和 ALT 活性與對照組比較，中、高劑量組均明顯升高，且高劑量組（P<0.01）差異極顯著，中劑量組（P<0.05）差異顯著，低劑量組無顯著變化（見圖 1 和圖 2），說明中、高劑量組引起細胞損傷導致血漿轉氨酶升高，且高劑量組比較嚴重引起急性損傷；ALP 活性與對照組比較，高劑量組24 h 顯著降低（P<0.05），低、中劑量組先升高后趨于正常，說明 ALP 在藥物劑量最大且作用時間最長時引起肝臟輕微膽汁淤積損傷（見圖 3）。
2.2 肝組織中 SOD、GSH 和 MDA 的變化。
實驗組大鼠肝組織的 SOD 活性與對照組相比總體都降低，高劑量組顯著降低（P<0.05），中劑量組隨時間延長而逐漸降低（P<0.05），低劑量組無顯著變化（P>0.05）（見圖 4）。GSH 含量與對照組比較，三個劑量組都降低，中、高劑量組差異極顯著（P<0.01）；低劑量組差異顯著（P<0.05），且隨時間先降低后恢復正常（見圖 5）。SOD 與 GSH 的顯著降低，表明對乙酰氨基酚降低了機體抗氧化能力，從而引起肝組織氧化應激。故實驗檢測 MDA 含量來反映脂質過氧化損傷程度，其結果與對照組比較，中、高劑量組顯著升高，差異極顯著（P<0.01）或差異顯著（P<0.05），低劑量組則無顯著變化（P>0.05）（見圖 6）。同時所測指標值見表 1、2、3（表中 A、B、C 分別代表低中高藥物劑量組）。
3 討論
對乙酰氨基酚進入體內經肝細胞色素 P450 酶代謝后，生成的毒性中間產物 N-乙酰苯醌亞胺（NAPQI），其與肝臟內還原型谷胱甘肽（GSH）結合，以無毒形式從尿中排出。但當對乙酰氨基酚劑量過大時，未被結合的 NAPQI 與肝細胞大分子共價結合，引起肝細胞壞死，細胞通透性增強，使轉氨酶釋放入血，從而造成血漿轉氨酶升高[6].因此，檢測血漿轉氨酶可間接表明肝損傷程度。實驗結果表明，對乙酰氨基酚中、高劑量組大鼠的 AST 和 ALT 值顯著升高，表明肝細胞線粒體損傷嚴重。同時 ALP 值可體現膽汁淤滯性疾病程度[7],實驗在 24 h 時，高劑量對乙酰氨基酚組大鼠 ALP 與對照組比較差異顯著（P<0.05），說明高劑量藥物作用時間最長時可引起大鼠輕度膽汁淤積。綜上可得高劑量對乙酰氨基酚組引起肝細胞急性損傷。LIANG YL 等[8-9]報道對乙酰氨基酚在肝內代謝過程中產生的自由基可引起肝細胞膜脂質過氧化。
機體 SOD 可清除自由基，抑制自由基啟動的脂質過氧化反應從而降低對機體損傷。GSH 能保護蛋白巰基不被氧化損傷，可與 SOD 共同消除超氧陰離子自由基，從而保護細胞內結構的穩定[10].可見檢測肝組織這 3 種酶的變化可體現肝細胞受損程度。結果表明，高劑量對乙酰氨基酚組大鼠肝組織的 SOD 和GSH 值顯著下降，說明機體抗氧化能力下降，而未被SOD 清除的、過量自由基引起了肝細胞脂質過氧化，發生了氧化肝損傷。而肝細胞受損和組織過氧化損傷還可增加 MDA 的含量。實驗高劑量組大鼠的MDA 含量顯著升高進一步證明高劑量對乙酰氨基酚組對大鼠肝臟的損傷作用。
綜上所述，對乙酰氨基酚低劑量組大鼠可通過GSH 消耗而代謝毒物不引起肝損傷。中劑量組可引起大鼠輕微肝損傷。高劑量對乙酰氨基酚組可成功誘導大鼠急性肝損傷，且以 24 h 最為顯著。因此，高劑量對乙酰氨基酚組可作為臨床造模參考，為研究CYP2E1 的誘導機制奠定了實驗基礎。
參考文獻：
[1] 趙麗娟，李紅，楊世杰。黃芪注射液對 D-半乳糖胺所致小鼠急性肝損傷的保護作用[J].吉林大學學報，2003（3）：280-282.
[2] 劉燕，買爾旦·馬合木提，古麗鮮·胡加?？垢窝字兴幯芯扛艣r[J].新疆醫科大學學報，2005,28（7）：686-687.
[3] 孫大慶，王穎，張東杰?？刮⑸锼幬餁埩魴z測方法研究新進展[J].黑龍江八一農墾大學學報，2014,26（1）：50-54.
[4] 雷霆雯，李紅梅，許慶忠，等。大青葉對小鼠肝臟 CYP2E1酶活性及信使核糖核酸表達的影響[J].中國醫院藥學雜志，2006（9）：1095-1097.
[5] 姚光弼，陳成偉。藥物與中毒性肝病[M].上海：上?？茖W技術出版社，2002.
[6] 耿忠誠，王秀娜，王燕。不同硒源對仔豬生產性能和抗氧化能力的影響[J]. 黑龍江八一農墾大學學報，2010,22（6）：31-35.
[7] 姚亞奔，占俊，于鐘。氯丙嗪、對乙酰氨基酚致大鼠肝損傷的實驗研究[J].中國藥師，2007（11）：1085-1087.
[8] LiangY L,Zhang Y F,Zhang C,et al. Melatonin alleviatesacetaminophen-induced acute hepatotoxicity in mice[J].Acta Univ Med Anhui ,2013,48（2）：138-141.
[9] Li P F,Fan Y J,Huang N S,et al. Comparative study ondetoxifing and protective effects of genistein andglucurolatone against liver injury [J].Acta Nutr Sin,2012,34（6）：595-598.
[10] 陳普艷，姜錦林，楊強。柔肝降酶合劑對大鼠四氯化碳誘導肝損害的防治作用[J].世界科學技術：中醫藥現代化，2014（4）：811-816.
