國際自然醫學會將新疆和田地區列為世界四大長壽區之一，和田的長壽人群稱之為自然長壽人群。
這一特殊人群為鑒定長壽的相關基因、 研究遺傳因素與長壽的關系提供了一個理想的模型。研究表明，除了健康生活方式和良好飲食習慣外， 基因差異可能也是長壽的影響因素之一。 長壽一般都無一導致大多數成年人死亡的主要疾病，例如心血管病、糖尿病、老年癡呆癥和癌癥等，這為我們尋找與長壽相關基因提供了線索。 本研究旨在探討新疆和田地區維吾爾族自然長壽人群中 ACE，ApoE 以 及HLA-DRB 基 因多態性與長壽的影響及相互關系 ，報告如下。
對象與方法
一、一般資料
選擇新疆和田地區≥90 歲的維吾爾族自然長壽老人 144 例（長壽組），平均年齡 95.53 歲；選擇同地區，年齡 60~70 歲者 69 例為老年組，平均年齡為66.71 歲；選擇以同一地區彼此無血緣關系的已自然死亡的 61~73 歲者 52 例 （家族史中無壽命大于80 歲者）為對照組，平均年齡為 67.60 歲。
年齡標準：人壽保險公司提供百歲老人名單；逐村逐戶走訪，以四代人為基礎；按 4 次重大歷史事件（1902 年第 1 次鼠疫大流行事件；1912～1913年第 2 次鼠疫發生；1936 年回民戰爭；1952 年土地改革） 推定年齡， 一般為 6 歲無記憶，12 歲開始記憶，結婚年齡為≥15 歲，能參軍打仗年齡為≥18 歲。
按此基本知識推斷再與 1981 年戶籍對照， 誤差≤5歲；三查三對，不同的醫師進行核對，不得出現矛盾；實際年齡參考公式=0.45×\\(自報年齡\\)十 50，實際年齡和自報年齡誤差不超過 3 歲。
二、方法
1. 人基因組 DNA 提?。?在知情同意的前提下，抽取靜脈血 5 ml，EDTA 抗凝， 低滲法破紅細胞，分離白細胞，基因組 DNA 采用酚/氯仿抽提的方法，純度為 A260：A280≥1.8。
2. PCR-SSP 法 擴增 HLA-DRB 等 位基因 ：PCR反應體系： 在 0.5 ml Ep 管中依次加入以下試劑，dNTP 1 μl，10×緩沖液 2.5 μl，DNA 聚合酶\\(上海復華生物技術有限公司提供\\)0.5 U， 消毒去離子水 16.5μl，5’引物及 3’引物各 1 μl，模板 DNA 1 μl 用石蠟油覆蓋，離心混勻，進行擴增，取 PCR 產物 10 μl 電泳，于紫外燈下觀察。
3. ACE 基因多態性檢測 ： 目的片斷擴增參照Rigat的方法設計一對引物，PCR 反應終末體積為 25 μl （其中包括模板 DNA 1 μl， 兩種引物分別為 2 pmol，MgCl2終濃度為 2 mmol/L，KCl 終濃度為50 mmol/L，Tris-HCl 終濃度為 10 mmol/L （pH 8.0），Taq 酶 0.5 U）進行擴增 ，取 PCR 擴 增產物 10 μl 電泳，于紫外燈下觀察結果，根據擴增片段長度確定其基因型別。
4. 單鏈構象多態性（SSCP）分析：取 PCR 擴增產物，經變性后電泳，硝酸銀染色分析電泳結果。 將不同帶型標本測序，確定變異堿基及其位置（測序由北京華大中生科技公司完成）。
5. ApoE 基因型檢測：參考文獻[3]設計合成一對引物 （由上海生工合成）。 PCR 反應終末體積為 25μl，采用美國 PTC-100 型 PCR 擴增儀進行擴增。 取PCR 產 物 10 μl 加 10 U Hha I 內 切酶 ，37 ℃酶 切 3h。 用 8%聚丙烯酰胺凝膠于 200 V 恒壓下垂直電泳3 h，銀染 ，據獲得的 6 種 酶切圖譜 ，判斷 apoE 基 因型。
三、統計學方法
應用 SPSS 17.0 統計軟件。各基因型頻率采用直接計數法。 基因頻率=陽性基因數/樣本數×2 （而HLA-DRB51, DR52, DR53陽性率=陽性基因數/樣本數）。 研究對象是否符合 Hardy-Weinberg 平衡用掊2檢驗；HLA-DRB、ACE 基因 I/D 多態性及 ApoE 基因分布，3 組間基因型及等位基因頻率比較用 R×C 表掊2檢驗。
結 果
一、臨床特點
本研究中患者均詳細詢問病史、 查體及行實驗室檢查；測量身高、體重、血壓。實驗室檢查包括測定血膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白和血糖水平。 結果顯示， 長壽組與老年組體質指數（BMI）間比較其差異有統計學意義（P < 0.01），長壽組和老年組之間收縮壓和舒張壓的比較差異有統計學意義（P < 0.05）；長壽組與對照組間收縮壓的比較差異有統計學意義（P < 0.01）；3 組間低密度脂蛋白比較差異有統計學意義（P 均<0.05），見表 1。
二、HLA 基因型的頻率分布
長壽組 HLA-DR1，DR6（14）基因頻率較對照組升高（P ＜ 0.05），與老年組比較差異無統計學意義；長壽組 HLA-DR9 頻率較對照組降低（P ＜ 0.05），較老年組顯著降低（P ＜ 0.01）；長壽組 HLA-DR51 基因頻率較老年組降低（P ＜ 0.05），與對照組比較差異無統計學意義。 其余各型基因頻率 3 組間比較差異無統計學意義（表 2）。
三、ACE 基因型和等位基因頻率的分布
長壽組 D/D 基因型頻率較對照組顯著升高（P <0.01），與老年組比較也有顯著升高（P < 0.05）；長壽組 D 等位基因頻率亦顯著高于對照組 （P < 0.05），與老年組比較差異無統計學意義； 另外，3 組間 DI、Ⅱ基因型比較其差異均無統計學意義，見表 3。
四、ApoE 基因型和等位基因頻率的分布
ApoE 基因有 6 種不同的基因型。 長壽組 ε3/3基因型頻率較老年組升高（P < 0.05），與對照組比較無明顯差異；長壽組 ε4/3 基因型頻率較對照組明顯降低（P < 0.001），較老年組也顯著降低（P < 0.01）；余基因型比較其差異無統計學意義。 大樣本群體調查發現 ApoE 基因型及等位基因頻率分布存在明顯種族差異。 該研究結果顯示，ε3/3 基因型也是維吾爾族的主要基因型，而 ε3 等位基因頻率介于白人和漢族人之間，表現出微弱種族差異性，見表 4。
討 論人類白細胞抗原 （human leukocyte antigen,HLA）是人類基因組的一個重要組成部分，蘊藏著豐富的遺傳信息，與機體免疫，疾病與腫瘤的發生、發展有密切的關系。 本次研究中， 長壽組 HLA-DR1，DR6（14）基因頻率高于對照組，而 HLA-DR9，DR51基因頻率明顯低于老年組，考慮 HLA-DR1、DR6（14）基因可能是長壽有利基因， 而 HLA-DR9，DR51基因可能是長壽的危險因素。 Takata 等于 20 世紀 90 年代檢測了日本著名的長壽宮 82 例百歲老人 （100~106歲）、20 例長壽老人（90~99 歲），其對照組為 159 例同一地區的成年人， 并各組分析了 HLA 基因頻率。
結果為百歲老人組 HLA-DRw9 基因頻率為 8.5％，長壽組為 5.0％，而對照組則為 30.8％。 在 HLA- DR1出現頻率又有不同，百歲老人 6％，長壽老人 10％，而對照組<0.63％。故提出 HLA 是決定人類壽命基因之一。 Henon 等研究了 336 例百歲以上退伍老兵和102 例 90 歲以上的隨機選自家庭的長壽老人，得出HLA-DR11分子的保護效應，充分地表現了免疫易感基因優勢， 有力地證明了 HLA-DR11基因的長壽效應。 Akisaka 等報道 HLA-DR9 在日本沖繩百歲老人中的頻率很低， 是長壽的危險因素，HLA-DR1則表現很高的頻率而被認為是有利因素。 Lio 等對撒丁島地區 120 例長壽老人和 86 例當地對照組進行研究，未發現 HLA-DRB1 各等位基因頻率間存在明顯差異。
血管緊張素轉換酶 （angiotensin-coverting en-zyme, ACE）基因位于人染色體 17q23 區，在第 16 內含子中含有 287bp 的插入/缺失多態性。 目前認為ACE 基因插入/缺失（I/D）多態性與心腦血管疾病有密切關系，而研究證實 ACE 基因 I/D 多態型與長壽有密切關系。 本研究中長壽組 DD 基因型頻率明顯高于其余 2 組，D 等位基因頻率高于對照組，說明DD 基因型和 D 等位基因是長壽的有利基因。 Faure等研究發現法國百歲老人組 D 型等位基因頻率明顯高于對照組，D 型等位基因頻率在百歲組中更為常見。 Davide 等研究發現，意大利百歲老人中 D/D基因型頻率及 D 型等位基因頻率明顯高于對照組。
而一項對歐洲人的研究說明，80 歲以上老年組的ACE DD 基因型和 D 等位基因頻率高于對照組，說明 ACE DD 基因型和 D 等位基因有助于健康和長壽。 而在我國對廣西巴馬壯族長壽人群的調查中同樣發現，ACE 基因的 D/D 基因型和 D 型等位基因與巴馬老人自然長壽有關，可能有利于長壽或其與長壽關聯的可能性大，而 I/I 型很可能不利于長壽或阻礙長壽。
載脂蛋白 E（apolipoprotein E, ApoE）位于 19 號染色體上，具有 6 種表現型和 3 種等位基因。 研究顯示，ApoE 基因多態性與長壽、心血管疾病、老年癡呆等均有相關性。 盡管在不同的人群中其基因型與長壽關系不同， 但在多個群體的證實 ApoE 是公認的長壽相關基因。 本組研究中，長壽組 ε3/3 基因型頻率較老年組升高（P < 0.05），可能是有利于長壽基因；長壽組 ε4/3 基因型頻率較對照組明顯降低（P < 0.001），較老年組也顯著降低（P < 0.01），可能對長壽不利。 Schachter 等報道法國百歲老人的ApoE 基因型頻率中，ε2 為 12.8％明顯高于年輕對照組的 6.8％， 而 ε4 為 5.8％， 較對照組的 11.2％明顯低，ε2 和 ε4 在 2 組之間相差幾乎為 2 倍。 由此認為法國老人長壽與 ApoE 基因多態性相關，ε2 具有延長效應，ε4 則有縮短效應。 但是在本組研究中，ε2，ε4 等位基因未表現出有差異。 另有相關研究表明，ε4 等位基因具有明顯的升高血清總膽固醇，低密度脂蛋白膽固醇和載脂蛋白 B 的作用，而血脂代謝異常在冠心病發病中起重要作用。
本研究中，3 組間生化及體重指數、血壓等的比較中，體質指數、收縮壓、舒張壓表現出有差異，但均在正常范圍之內，故在本研究中未進一步研究。 3 組間低密度脂蛋白比較也有差異， 長壽組血中低密度脂蛋白含量較老年組和對照組低， 血中低密度脂蛋白含量高可引起血管中脂質沉積增加、 動脈粥樣硬化，是心腦血管疾病發生的基礎，因此長壽組中的低密度脂蛋白含量低也有利于長壽。
本次研究對象生活環境相同，同民族，具有類似的遺傳因素，本研究顯示，遺傳因素決定不同個體的健康長壽， 基因決定人類能否辛免于影響長壽的疾病。多種基因共同作用決定人類能否健康長壽。長壽是年齡依賴的多種因素影響的結果， 長壽的遺傳物質與年齡增長相互獨立，是屬于保守性，可世代傳遞的祖先基因。由于長壽的機制尚不完全清楚，有研究表明長壽的原因是減少疾病的發生尤其是患心臟病和 AD 的危險性減少和保持良好的機體免疫狀態是增長壽命的有效途徑。
