黃連阿膠湯出自張仲景的《傷寒論》，由黃連、黃芩、芍藥、阿膠、雞子黃組成，主治“少陰病，得之二三日以上，心中煩，不得臥者”。目前，黃連阿膠湯臨床上常用于神經精神系統疾患且多伴有陰虛火旺、心腎不交之失眠，出血性疾患，熱性疾患包括慢性咽炎等癥。目前尚未見黃連阿膠湯治療慢性咽炎的相關藥理研究以及不同煎煮方法對其作用的影響。本文采用甲狀腺片和氨水聯合制造陰虛型慢性咽炎大鼠模型，研究不同煎煮方法黃連阿膠湯樣品對大鼠三碘甲狀腺原氨酸（triiodothyronine，T3）、甲狀腺素（thyroxine，T4）、腫瘤壞死因子（tumornecrosisfactor，TNF-α）和血管內皮生長因子（tascularendothelialgrowthfactor，VEGF）含量及對血流變學的影響，分析黃連阿膠湯治療慢性咽炎的途徑及機制，探討不同煎煮方法對黃連阿膠湯治療慢性咽炎作用的影響。
材料
1.動物
清潔級健康雌性SD大鼠48只，鼠齡7周，體質量（200±20）g，由鄭州大學醫學院實驗動物中心提供，合格證號：SCX（豫）2010-0002。
2.藥品
黃連、黃芩、白芍（南京海源飲片公司，批號：L110523H、110217H、110508H）；阿膠（山東福膠集團東阿鎮阿膠有限公司，批號：1009074）；雞子黃（鄭州市政四街思達超市，批號：S20120215）；甲狀腺片（上海實業聯合集團長城藥業有限公司，批號：20110303）；清咽片（佛山德眾藥業有限公司，批號：12005\\)；烏拉坦（北京化工廠，批號：20010328）；大鼠VEGF、TNF-α、T3、T4ELISA檢測試劑盒（R&B有限公司，批號分別為20120302A、20120302A、20120302A、20120302A）。
3.儀器
BS210S型萬分之一電子天平（北京SARTORIUS有限公司，max210g，d0.1mg）；DHL-A（3+1）型北京東華原十功能煎藥機（北京東華原醫療設備有限公司）；BMG型多功能酶標儀（德國）；LBY-N6K自清洗快測血流變儀（北京普利生儀器有限公司）。
方法
1.試藥的制備
傳統煎煮黃連阿膠湯制備：取處方量黃連12g，黃芩6g，白芍6g，加水15倍量，浸泡30min后，文火煎煮30min，二煎加水13倍量，煎煮20min，分別過濾，合并2次水煎液，濃縮至每毫升含生藥0.5g，在不低于60℃的溫度條件向合煎液中加入阿膠粗粉9g攪拌烊化；待溫度降至50℃以下，加入雞子黃2枚，攪拌即得。
機械常壓煎煮黃連阿膠湯的制備：取5倍處方量黃連60g、黃芩30g、白芍30g，加水18倍量，浸泡30min后，文火煎煮40min，二煎加水16倍量，煎煮40min，分別過濾，合并2次水煎液，量取體積得1870mL，取出374mL濃縮至每毫升含生藥0.5g，在不低于60℃的溫度條件向合煎液中加入阿膠粗粉9g烊化；待溫度降至50℃以下，加入雞子黃2枚，攪拌即得。
機械高壓煎煮黃連阿膠湯的制備：取5倍處方量黃連60g，黃芩30g，白芍30g，加水12倍量，浸泡30min后，文火煎煮30min，二煎加水10倍量，煎煮30min，分別過濾，合并2次水煎液，量取體積得2000mL，取出400mL濃縮至每毫升含生藥0.5g，在不低于60℃的溫度條件向合煎液中加入阿膠粗粉9g攪拌烊化5min；待溫度降至50℃以下，加入雞子黃2枚，攪拌即得。
陽性組樣品的制備：取4片清咽片溶解于50mL蒸餾水中混勻即得。
2.動物分組
適應性飼養3d后，隨即分為6組（每組8只），分別為：空白對照組、模型組、陽性對照清咽片組、黃連阿膠湯傳統煎煮組、黃連阿膠湯機械常壓組、黃連阿膠湯機械高壓組（以下簡稱空白組、模型組、陽性組、傳統煎煮組、機械常壓組、機械高壓組）。實驗室溫度20-26℃，相對濕度40%-60%。
大鼠自由飲食飲水
3.給藥情況
大鼠適應性飼養3d，從第4天起，除空白組外，其他組大鼠灌胃甲狀腺片溶液（1.25mg/100g體質量），空白組大鼠灌等量0.9%氯化鈉溶液連續14d，同時將濃度為2.5%的氨水裝入達芬霖喉露噴霧器內，給需造模的大鼠噴咽，每天1次，每次噴3掀，連續噴15d?？瞻捉M動物用0.9%氯化鈉溶液噴咽，操作方法與造模組相同。每天觀察動物咽部的黏膜形態、色澤及分泌物情況等。第20天進行灌胃給藥，各組動物藥物灌胃劑量如下：空白組給予0.9%氯化鈉溶液；陽性組給予清咽片混懸液0.3g/kg；傳統煎煮組給予傳統煎煮混懸液3g/kg；機械常壓組給予機械常壓混懸液3g/kg；機械高壓組給予機械高壓混懸液3g/kg，給藥體積均為1mL/100g，給藥時間1周。
4.實驗方法
連續灌胃7d后，用20%烏拉坦0.5mL/100g麻醉各組大鼠，自腹主動脈取血，其中4mL以6000r/min離心10min，收集血清。采用酶聯免疫雙抗體法進行測定，具體步驟按試劑盒說明書進行。用酶標儀在450nm波長下測定各孔吸光度值（Ａ值），繪制標準曲線，依據標準曲線計算出各待測樣本中TNF-α、VEGF、T3、T4的含量；另取4mL進行EDTA抗凝，用LBY-N6K自清洗快測血流變儀，測定全血黏度、血漿黏度、全血還原黏度、紅細胞壓積、紅細胞剛性、紅細胞聚集指數。
5.統計學方法。
數據以x-±s表示，采用SPSS19.0軟件作統計分析，組間比較采用單因素方差分析，P<0.05為差異有統計學意義。
結果1.T3、T4、TNF-α、VEGF測定結果模型組各項指標較空白組明顯升高（P<0.01）；陽性組及各給藥組較模型組明顯降低（P<0.01，P<0.05）；不同煎煮方法組之間各指標含量變化均不大，見表1。
2.血流變學指標測定結果
模型組各個血流變指標除紅細胞壓積外均較空白組有明顯的升高（P<0.01）；同時陽性組及各給藥組的血流變各項指標除血漿黏度和紅細胞壓積外其余均較模型組明顯降低（P<0.01，P<0.05）；不同煎煮方法組之間血流變各項指標除紅細胞壓積外均沒有明顯的差異，見表2-表3。
討論 T3和T4升高是甲亢的重要診斷指標，甲狀腺素造?？梢阅M臨床常見疾病甲狀腺機能亢進,多屬于陰虛證。TNF-α是炎性反應中很重要的損傷性細胞因子，炎性細胞所分泌的TNF-α能進一步損傷組織，放大炎性反應，故抑制TNF-α的合成、分泌，能有效地抑制局部炎性反應。VEGF可特異性作用于血管內皮細胞上的受體結合，可引起內皮細胞增殖、血管通透性提高等效應，可在炎癥部位表皮修復過程中發揮促進血管生成的作用，加速炎癥部位的愈合。也就是說在炎癥形成過程中會分泌較多的VEGF。慢性咽炎的咽部存在慢性充血、血管曲張、咽后壁淋巴濾泡增生、咽側索肥厚等改變,均屬中醫“血瘀”的范疇。一般血瘀證多有血液流變學方面的改變。正常情況下,紅細胞在流動中處于分散狀態，出現一定的原因之后紅細胞會產生聚集，就產生了全血黏度比、血漿黏度比等的增高,血液呈“高黏狀態”。也就是常說的血液的黏、凝、聚改變。出現慢性咽炎則血液出現明顯的黏、凝、聚。用藥后，該狀態有所減輕。黃連阿膠湯臨床上常用于神經精神系統疾患且多伴有陰虛火旺、心腎不交之失眠，出血性疾患，熱性疾患包括慢性咽炎等癥。目前尚未見黃連阿膠湯對于慢性咽炎的相關藥理研究。故文章選取與陰虛型慢性咽炎密切相關的T3、T4、TNF-α、VEGF及血流變學指標，分析黃連阿膠湯不同煎煮方法對陰虛型慢性咽炎的影響，探討黃連阿膠湯在治療慢性咽炎的機理和途徑。
模型組T3、T4較空白組明顯升高可知陰虛造模成功。同時發現大鼠搔抓口部，頻飲水而量不多，口腔分泌物增多，咽局部微腫脹，模型組大鼠較為明顯以及陽性組TNF-α、VEGF較模型組均具有顯著性下降，提示慢性咽炎造模成功。
傳統煎煮組、機械常壓組、機械高壓組與模型組相比有顯著性差異說明黃連阿膠湯對慢性咽炎大鼠具有一定的作用，其作用機制可能與改善TNF-α、VEGF、血流變學指標有關。但各給藥組之間均沒有明顯的差異，提示本文采取的3種煎煮方法制備的黃連阿膠湯對陰虛型慢性咽炎小鼠的作用影響不大。
參考文獻
[1]趙唯含,杜金行.心腎不交理論在中醫現代臨床中的應用.中華中醫藥雜志,2012,27\\(10\\):2621-2623
[2]朱志偉,賀琲珺.黃連阿膠湯臨床應用近況.國醫論壇,2003,18\\(6\\):48
[3]南淑玲,謝丹,章建,等.養陰清肺湯對慢性咽炎大鼠病理形態學及血液流變學實驗觀察.吉林中醫藥,2010,30\\(9\\):813-815
